Από μονομερές AEEA σε διμερές

Η αναλογία φαρμάκου προς αντισώματα (DAR) είναι ένα βασικό ποιοτικό χαρακτηριστικό των συζευγμένων φαρμάκων με αντισώματα (ADCs) που επηρεάζει άμεσα την αποτελεσματικότητα και την τοξικότητα. Το ιδανικό DAR είναι συνήθως 2-4, αλλά πολλά αποτελεσματικά ωφέλιμα φορτία όπως το MMAE και το DM1 έχουν ισχυρή υδροφοβικότητα. Όταν χρησιμοποιείτε συνδετήρες βραχείας αλυσίδας ή απλούς PEG, το DAR που υπερβαίνει το 4 οδηγεί σε επιταχυνόμενη συσσώρευση και κάθαρση αντισωμάτων. Η εισαγωγή του AEEA-AEEA παρέχει μια αποτελεσματική λύση σε αυτό το πρόβλημα.
Σε σύγκριση με έναν μόνο σύνδεσμο AEEA,ΑΕΕΑ-ΑΕΕΑδιπλασιάζει το μήκος της αλυσίδας PEG και έχει ισχυρότερη υδροφιλικότητα. Κάθε μονάδα διμερούς συνεισφέρει 4 δεσμούς αιθέρα και 2 δεσμούς αμιδίου, οι οποίοι μπορούν να δεσμεύσουν περισσότερα μόρια νερού και να σχηματίσουν ένα πιο πυκνό στρώμα ενυδάτωσης. Όταν πολλαπλά υδρόφοβα φάρμακα συνδέονται στην επιφάνεια του αντισώματος μέσω του AEEA-AEEA, το στρώμα ενυδάτωσης μπορεί να θωρακίσει αποτελεσματικά τις υδρόφοβες αλληλεπιδράσεις μεταξύ των φαρμάκων και να αποτρέψει τη συσσώρευση αντισωμάτων. Πειραματικά δεδομένα δείχνουν ότι τα ADC που κατασκευάζονται με χρήση AEEA-AEEA διατηρούν κολλοειδή σταθερότητα (ρυθμός συσσώρευσης<5%) even when DAR reaches 6-8, while the control using single AEEA shows significant precipitation when DAR>4.
Η στρατηγική ρύθμισης του DAR αναφέρεται στην προ-σύνδεση του AEEA-AEEA με ένα φάρμακο στην τεχνολογία σύζευξης κατευθυνόμενης σε τοποθεσία και στη συνέχεια στην αντίδραση με κατασκευασμένη κυστεΐνη στο αντίσωμα. Προσαρμόζοντας τη μοριακή αναλογία του συνδετικού φαρμάκου προς το αντίσωμα (συνήθως 3:1 έως 10:1), η τιμή DAR μπορεί να ελεγχθεί με ακρίβεια. Για παράδειγμα, ένα 2-πλάσιο πλεόνασμα μπορεί να δώσει προϊόν DAR2, ένα 4-πλάσιο πλεόνασμα μπορεί να δώσει DAR4 και ένα 8πλάσιο πλεόνασμα μπορεί να επιτύχει DAR6-8. Το HIC-HPLC ή η φασματομετρία μάζας μπορεί να προσδιορίσει με ακρίβεια την κατανομή του DAR. Για ενδείξεις όγκου που απαιτούν υψηλό φορτίο, όπως ο καρκίνος του μαστού με χαμηλή έκφραση HER2 και ο μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα, το AEEA-AEEA καθιστά δυνατή την υψηλή DAR και βελτιώνει σημαντικά το αποτέλεσμα θανάτωσης του όγκου. Προκλινικές μελέτες έχουν δείξει ότι το ADC του DAR6 αυξάνει το ποσοστό αναστολής του όγκου κατά περίπου 40% σε σύγκριση με το ADC του DAR4 στην ίδια δόση, χωρίς να αυξάνει σημαντικά την τοξικότητα.